Langendorff離體心臟灌流系統(tǒng)適用于離體哺乳動物心臟灌流(langendorff氏法)和離體心臟冠脈流量(coronaryfilw.cf)的測定.可直接進行恒壓灌流,加上蠕動泵可進行恒流灌流.
實驗步驟:
A. 配制37℃ K-H液(1.25 CaCl2,,130 NaCl,5.4 KCl,,11 葡萄糖,0.5 MgCl2,,0.5 NaH2PO4及25 NaHCO3),,向K-H液中通入95%O2-5% CO2氣體,,緩沖液PH 值為7.4,,并取部分K-H液放入冰箱中,使其溫度降到4℃,。
B. 清潔Langendorff管路,,每次使用前先用1000ml蒸餾水沖洗,打開水浴循環(huán),,再用K-H液將整個管路系統(tǒng)進行沖洗,。
C. 魯米鈉腹腔注射麻醉動物(100mg/kg),并向肝靜脈注射100IU肝素,,頸動脈放血處死動物,,同時快速分離心臟,放入4℃K-H液中擠凈血液并稱重,。
D. 將心臟迅速固定在Langendorff 灌流系統(tǒng)中,,通過主動脈以85cmH2O壓力逆行灌注,通過肺靜脈插入導管至左心房,。
E. 心臟復跳后,,將一個球囊插入心臟左心室,球囊和壓力換能器相連,,在電腦上記錄左室內壓,,調整左室舒張內壓(LVEDP)在4~10mmHg之間。待心臟左室收縮壓(LVESP)穩(wěn)定后且大于80mmHg,,心率大于200次/分,,可繼續(xù)實驗,并記錄心電圖(ECG),、主動脈流量(AF),、冠脈流量(CF)、左室收縮末壓(LVESP)等指標。
F. 缺血再灌注方案:關閉灌流液,,停灌心臟45min后,,打開灌流液進行復灌90min(復灌起始15min通過肺靜脈給予一定的壓力輔助),同時記錄相關指標,。
G. 實驗結束后,,用蒸餾水沖洗整個管路系統(tǒng),防止K-H液殘留在管路中,。