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Tris中文品名為三羥甲基氨基甲烷,,CAS77-86-1。是一種白色結(jié)晶或粉末,。溶于乙醇和水,微溶于乙酸乙酯,、苯,,不溶于乙醚,、四氯化碳,對(duì)銅,、鋁有腐蝕作用,有刺激性的化學(xué)物質(zhì),。
蛋白質(zhì)組學(xué)即從蛋白質(zhì)組的水平進(jìn)一步認(rèn)識(shí)生命活動(dòng)的機(jī)理和疾病發(fā)生的分子機(jī)制,,而在蛋白質(zhì)組學(xué)的研究中,蛋白質(zhì)的提取是**基礎(chǔ)也**關(guān)鍵的環(huán)節(jié)之一,,Tris是植物蛋白質(zhì)提取中常用的試劑,方法包括Tris-HCl法,、酚法、Tris-丙酮-酚法,。本文將對(duì)這幾種方法進(jìn)行分析總結(jié),。
1.Tris-HCl法
Tris-HCl法提取的蛋白圖譜效果比用TCA丙酮法提取的效果好,。TCA丙酮法所提取蛋白在小分子量區(qū)域分布不均勻,蛋白點(diǎn)不清晰,,水平條紋與豎直條紋較為嚴(yán)重,而Tris-HCl法克服了上述缺點(diǎn),,并分離出TCA丙酮法所不易分離出的酸性蛋白,,除分離到較多的中等分子量的蛋白質(zhì)外,,還能得到很多的高分子量和低分子量蛋白質(zhì)。
Tris-HCl法操作簡(jiǎn)便,,時(shí)間較短成本適中等優(yōu)勢(shì),提取步驟簡(jiǎn)單,,蛋白質(zhì)損失少,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好,。
2.酚法
酚法利用了Tris-飽和酚的特性:酚是蛋白質(zhì)的良好溶劑,在樣品制備過程中,,蛋白質(zhì)和脂類溶于酚相,鹽,、核酸、多酚和多糖等可溶性物質(zhì)進(jìn)入水相,;通過增加離心力和離心時(shí)間,可以盡可能地把密度大的糖離至上清液的上層,;酚相中的蛋白質(zhì)通過乙酸銨的甲醇溶液沉淀,再用冷丙酮多次清洗蛋白,,可以去除色素和銨離子等雜質(zhì)。
該方法在處理含有大量干擾物質(zhì)的植物樣品中非常有效,,但這種方法相對(duì)復(fù)雜,,耗時(shí)長。
3.Tris-丙酮-酚法
將TCA丙酮法與酚法結(jié)合后用于提取蛋白,,融合了TCA丙酮沉淀法和酚法的優(yōu)點(diǎn),。先用含有乙酸銨的甲醇溶液清洗殘留的TCA并提升溶液的pH到7.0以上,再使用酚和SDS的混合物來溶解蛋白,。酚-SDS聯(lián)合提取比酚,、SDS緩沖液?jiǎn)为?dú)提取更有效。Tris-丙酮-酚法在很多植物的蛋白提取上都取得了非常好的效果,,而且電泳圖譜背景和條帶都很清晰,,蛋白質(zhì)點(diǎn)多,可廣泛應(yīng)用于植物的葉片和果實(shí)中蛋白質(zhì)的提取,。
該提取方法非常省時(shí),,提取的總時(shí)間在1h左右,大大縮短了傳統(tǒng)方法提取蛋白所需的時(shí)間,。
對(duì)于植物蛋白的提取,,不僅樣品多樣,而且每種植物所含有的成分也不同,,其中的干擾因素也多,,所以沒有一種方法可以適用于各種樣品。在實(shí)驗(yàn)中,,**先要明確目的,,是獲得一種目標(biāo)蛋白還是獲得所有蛋白,然后再根據(jù)樣品特點(diǎn)來選擇提取方法,,進(jìn)行摸索優(yōu)化。
上述講述TRIS在植物蛋白提取中的應(yīng)用,,除此之外TRIS(三羥甲基氨基甲烷)還有許多用途,。可用于磷霉素的**,,亦可作硫化促進(jìn)劑,、化妝品(霜?jiǎng)⑾磩?,、礦物油,、石蠟乳化劑。還可用作酸性氣體吸收劑,,配制緩沖液,、表面活性劑、乳化劑和促進(jìn)劑,。德晟研發(fā)銷售TRIS有15年經(jīng)驗(yàn),,擁有成熟的研發(fā)團(tuán)隊(duì),,對(duì)TRIS有較深的研究,可為客戶解決技術(shù)問題,,有需求的可來電咨詢,。
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