細胞名稱：人軟骨細胞C-28I2

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1,；1.5ml凍存管x2

細胞數(shù)量：1x10^6,；1x10^6

保存溫度：37℃,；-198℃

運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸

安全等級：1

用途限制：僅供科研2類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡介：人軟骨細胞C-28I2又名C28/I2 C28 I2,取自15歲女性供體,，該細胞經(jīng)過SV40永生化處理,。

驗收細胞注意事項

1、收到人軟骨細胞C-28I2細胞,，請查看瓶子是否有破裂,，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁,，如有請盡快聯(lián)系,。

2、收到人軟骨細胞C-28I2細胞,，如包裝完好,，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題,，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來,，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時,，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶,，應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下,，再于顯微鏡下觀察,，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁,，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3,、收到人軟骨細胞C-28I2細胞后,，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞,。若懸浮的細胞較多,，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中,。棄掉原液,，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清,。剛接到細胞,，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％,。

4,、收到人軟骨細胞C-28I2時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度,，如為貼壁細胞,，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時,，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。如為懸浮細胞,，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,，吸出上清,，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

5,、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里,，存放于4℃冰箱,，以備不時之需。

6,、24小時后,，人軟骨細胞C-28I2形態(tài)已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代,。（貼壁細胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,，加3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,，消化時間以具體細胞為準,，一般1-3分鐘，不超過5分鐘,?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁,，見細胞脫落下來,，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞,，使之**脫落,，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清,，視細胞數(shù)量決定分瓶數(shù),，一般一傳二，如細胞量多可一傳三,，有些細胞不易傳得過稀,，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經(jīng)驗為準,。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁,，直接將溶液吸入離心管離心即可。

---

7,、貼壁細胞,，懸浮細胞。嚴格無菌操作,。換液時,，換新的細胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃,，5%CO2培養(yǎng),。

特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng),。