淄博細(xì)胞培養(yǎng)室|萬級(jí)無菌實(shí)驗(yàn)室|微生物實(shí)驗(yàn)室凈化設(shè)計(jì)安裝|歐凱凈化

細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌,、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等）,，使之生存,、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)可少的過程,，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆,。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,，這是克隆技術(shù)可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆,。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),，通過細(xì)胞培養(yǎng)既可以獲得大量細(xì)胞，又可以借此研究細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),、細(xì)胞的合成代謝,、細(xì)胞的生長增殖等。

一,、分類：

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)

在所有的細(xì)胞離體培養(yǎng)中,，**困難的是動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。下面是它所需要的特殊條件,。

⑴血清：動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)常常需要血清,。**常用的是小牛血清。血清提供生長必需因子,，如激素、微量元素,、礦物質(zhì)和脂肪,。在這里，血清等于是動(dòng)物細(xì)胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液,。

⑵支持物：大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞有貼壁生長的習(xí)慣,。離體培養(yǎng)常用玻璃，塑料等作為支持物,。

⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細(xì)胞培養(yǎng)過程中不斷進(jìn)行調(diào)節(jié),，不斷維持所需要的氣體條件。

植物細(xì)胞培養(yǎng)

⑴光照：離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞對(duì)光照條件不甚嚴(yán)格,，因?yàn)榧?xì)胞生長所需要的物質(zhì)主要是靠培養(yǎng)基供給的,。但光照不但與光合作用有關(guān)，而且與細(xì)胞分化有關(guān),，例如光周期可對(duì)性細(xì)胞分化和開花調(diào)控作用,，所以以獲得植株為目的的早期植物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，光照條件特別重要。以植物細(xì)胞離體培養(yǎng)方式獲得重要物質(zhì),，如藥物的過程,，植物細(xì)胞大多是在反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng)。

⑵激素：植物細(xì)胞的分裂和生長特別需要植物激素的調(diào)節(jié),，促進(jìn)生長的生長素和促進(jìn)細(xì)胞分裂的分裂素是**基本的激素,。植物細(xì)胞的分裂，生長,，分化和個(gè)體生長周期都有相應(yīng)的激素參與調(diào)節(jié),。和動(dòng)物細(xì)胞相比，植物細(xì)胞離體培養(yǎng)對(duì)激素要求的原理已經(jīng)了解,，其應(yīng)用技術(shù)也已相當(dāng)成熟,，已經(jīng)有一套能使用的培養(yǎng)液。同時(shí)解決了植物細(xì)胞對(duì)水,、營養(yǎng)物,、激素、滲透壓,、酸堿度,、微量元素等的需求。

微生物細(xì)胞培養(yǎng)

微生物多為單細(xì)胞生物,，野生生存條件比較簡單,。所以微生物人工培養(yǎng)的條件比動(dòng)植物細(xì)胞簡單得多。其中厭氧微生物培養(yǎng)比好氧微生物復(fù)雜,，因?yàn)閲?yán)格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度,，而好氧微生物則只需要通過不斷攪拌提供無菌氧氣。微生物對(duì)培養(yǎng)條件要求不如動(dòng)植物細(xì)胞那樣苛刻,，玉米漿,、蛋白胨、麥芽汁,、酵母膏等成為良好的微生物天然培養(yǎng)基,。對(duì)于一些特殊微生物的營養(yǎng)條件要求，可以在這些天然培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上額外添加,。

二,、環(huán)境因素

1．無菌環(huán)境

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的*要條件。細(xì)胞在活體內(nèi),，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力,。為**細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長繁殖,，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作,。

常見的微生物污染有支原體,、細(xì)菌、真菌,。支原體無致死毒性,，可與細(xì)胞長期共存，對(duì)細(xì)胞有潛在影響,，但體積小,，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進(jìn)行檢測,。細(xì)菌增殖快,，在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增，并產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞,。真菌的種類繁多,，肉眼可見，漂浮于培養(yǎng)液面上,，可呈絲狀,、管狀或樹枝狀等。

2.合適的溫度

一般哺乳類與禽類細(xì)胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃,，不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞的生長,。細(xì)胞對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力，在低溫下,，細(xì)胞的代謝活力及核分裂能力降低,。若溫度不0℃，雖然細(xì)胞代謝受到影響,，但無損傷作用,；25～35℃時(shí)，細(xì)胞以緩慢的速度生長,；但若被置于40℃數(shù)小時(shí)，則不僅不利于細(xì)胞生存,、生長,，甚至可導(dǎo)致其死亡。

3.適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞發(fā)生褶皺,、腫脹,、破裂。因此,，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞的重要條件之一,。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力，實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞,。

4．氣體環(huán)境與pH

細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞生存的必要條件,。氧氣參與細(xì)胞的三羧酸循環(huán),，為細(xì)胞生存、代謝與合成提供能量,；二氧化碳既是細(xì)胞的代謝產(chǎn)物,，是細(xì)胞生長的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān),。大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4,。在開放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜,。

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