淄博細胞培養(yǎng)室|萬級無菌實驗室|微生物實驗室凈化設(shè)計安裝|歐凱凈化

細胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等）,，使之生存、生長,、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫細胞克隆技術(shù),，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù),。不論對于整個生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,，細胞培養(yǎng)都是一個可少的過程,，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)?？寺　＜毎囵B(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞,，這是克隆技術(shù)可少的環(huán)節(jié),，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學(xué)研究方法中重要和常用技術(shù),，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞,，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的合成代謝,、細胞的生長增殖等,。

一、分類：

動物細胞培養(yǎng)

在所有的細胞離體培養(yǎng)中,，**困難的是動物細胞培養(yǎng),。下面是它所需要的特殊條件。

⑴血清：動物細胞離體培養(yǎng)常常需要血清,。**常用的是小牛血清,。血清提供生長必需因子，如激素,、微量元素,、礦物質(zhì)和脂肪,。在這里,，血清等于是動物細胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液。

⑵支持物：大多數(shù)動物細胞有貼壁生長的習(xí)慣,。離體培養(yǎng)常用玻璃,，塑料等作為支持物。

⑶氣體交換：二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養(yǎng)過程中不斷進行調(diào)節(jié),，不斷維持所需要的氣體條件,。

植物細胞培養(yǎng)

⑴光照：離體培養(yǎng)的植物細胞對光照條件不甚嚴格，因為細胞生長所需要的物質(zhì)主要是靠培養(yǎng)基供給的,。但光照不但與光合作用有關(guān),，而且與細胞分化有關(guān)，例如光周期可對性細胞分化和開花調(diào)控作用,，所以以獲得植株為目的的早期植物細胞培養(yǎng)過程中,，光照條件特別重要。以植物細胞離體培養(yǎng)方式獲得重要物質(zhì),，如藥物的過程,，植物細胞大多是在反應(yīng)器中懸浮培養(yǎng)。

⑵激素：植物細胞的分裂和生長特別需要植物激素的調(diào)節(jié),，促進生長的生長素和促進細胞分裂的分裂素是**基本的激素,。植物細胞的分裂,，生長，分化和個體生長周期都有相應(yīng)的激素參與調(diào)節(jié),。和動物細胞相比,，植物細胞離體培養(yǎng)對激素要求的原理已經(jīng)了解，其應(yīng)用技術(shù)也已相當(dāng)成熟,，已經(jīng)有一套能使用的培養(yǎng)液,。同時解決了植物細胞對水、營養(yǎng)物,、激素,、滲透壓、酸堿度,、微量元素等的需求,。

微生物細胞培養(yǎng)

微生物多為單細胞生物，野生生存條件比較簡單,。所以微生物人工培養(yǎng)的條件比動植物細胞簡單得多,。其中厭氧微生物培養(yǎng)比好氧微生物復(fù)雜，因為嚴格厭氧需要維持二氧化碳等非氧的惰性氣體濃度,，而好氧微生物則只需要通過不斷攪拌提供無菌氧氣,。微生物對培養(yǎng)條件要求不如動植物細胞那樣苛刻，玉米漿,、蛋白胨,、麥芽汁、酵母膏等成為良好的微生物天然培養(yǎng)基,。對于一些特殊微生物的營養(yǎng)條件要求,，可以在這些天然培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上額外添加。

二,、環(huán)境因素

1．無菌環(huán)境

無毒和無菌是體外培養(yǎng)細胞的*要條件,。細胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵,，但細胞在體外培養(yǎng)的過程中,，缺乏機體免疫系統(tǒng)的保護而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為**細胞能在體外環(huán)境中生長繁殖,，必須要確保無菌工作區(qū)域,、良好的個人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作,。

常見的微生物污染有支原體,、細菌、真菌,。支原體無致死毒性,，可與細胞長期共存,，對細胞有潛在影響，但體積小,，不易鑒別,，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進行檢測。細菌增殖快,，在短時間內(nèi)即可大量擴增,，并產(chǎn)生毒素殺死細胞。真菌的種類繁多,，肉眼可見,，漂浮于培養(yǎng)液面上，可呈絲狀,、管狀或樹枝狀等,。

2.合適的溫度

一般哺乳類與禽類細胞在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會影響細胞的生長,。細胞對低溫的耐受能力要強于對高溫的耐受能力,，在低溫下，細胞的代謝活力及核分裂能力降低,。若溫度不0℃,，雖然細胞代謝受到影響，但無損傷作用,；25～35℃時,，細胞以緩慢的速度生長；但若被置于40℃數(shù)小時,，則不僅不利于細胞生存,、生長，甚至可導(dǎo)致其死亡,。

3.適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會引起細胞發(fā)生褶皺、腫脹,、破裂,。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細胞的重要條件之一,。多數(shù)體外培養(yǎng)的細胞對滲透壓都有一定的耐受能力,，實際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細胞,。

4．氣體環(huán)境與pH

細胞的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境,，氧氣、二氧化碳是細胞生存的必要條件,。氧氣參與細胞的三羧酸循環(huán),，為細胞生存,、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細胞的代謝產(chǎn)物,，是細胞生長的必需成分,，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細胞適宜的pH范圍往往是7.2～7.4,。在開放式培養(yǎng)中,，以5%的二氧化碳氣體比例為宜。

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